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CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS
DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
Gordillo, et al.
Reciena Vol.3 Núm. 1 (2023): 16-25
CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS DE
LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
Gordillo, et al.
Reciena Vol.3 Núm. 1 (2023): 16-25
CHARACTERIZATION OF BACTERIAL STRAINS WITH RESISTANCE
TO LOW TEMPERATURES FROM THE TOBAR DONOSO LAGOON IN
THE PIÑAN COMMUNE OF THE IMBABURA PROVINCE
CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA
A BAJAS TEMPERATURAS DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN
LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
Carrera de Ingeniería en Biotecnología Ambiental, Escuela Superior Politécnica de Chimborazo, Riobamba, Ecuador.
Investigador independiente, Ibarra, Ecuador.
* E-mail: joselynlizethgv@gmail.com
En el presente trabajo se caracterizaron las colonias
bacterianas extremólas de la laguna Tobar Donoso en
la comuna Piñán de la provincia de Imbabura, para ello
se desarrolló el aislamiento de cepas bacterianas en el
medio de crecimiento Plate Count Agar (PCA) mediante
la técnica de vertido en placa y los cultivos fueron
incubados a 10, 20 y 37 grados centígrados (°C) durante
120, 48 y 24 horas respectivamente, evidenciando el
crecimiento de 19 colonias contables representativas,
mismas que fueron sometidas a una caracterización
macroscópica y aplicadas la técnica de tinción Gram
para establecer una clasicación más especíca.
Estas colonias fueron puricadas en el mismo medio
de cultivo e inoculadas por estriado y posterior a ello
fueron sometidas a pruebas bioquímicas y enzimáticas;
en base al comportamiento demostrado por cada cepa
bacteriana se seleccionó a 5 con un perl característico
del género Pseudomonas y fueron evaluadas en presión
selectiva en un medio mínimo Bushnell Haas con
diversas concentraciones de hidrocarburos cuyo
crecimiento fue evaluado por medio de densidad óptica
a 600 nm. Los resultados arrojaron un porcentaje
mayoritario de crecimiento a 10 y 20°C por lo que se
determina la existencia de microorganismos psicrólos
en la laguna Tobar Donoso con un elevado potencial
enzimático; además se demostró mayor resistencia al
benceno en una concentración de 2% por parte de las
colonias de 10°C, en tanto que, en diésel al 1% la cepa
más tolerable corresponde a un aislamiento de 37°C.
Los microorganismos psicrólos de la laguna Tobar
Donoso presentaron una elevada capacidad enzimática
y una resistencia no signicativa a hidrocarburos; sin
Gordillo-Vásquez, Joselyn joselynlizethgv@gmail.com
Peñael-Muñoz Erika erikita2101@gmail.com
https://reciena.espoch.edu.ec/index.php/reciena/index
ISSN 2773 - 7608
Facultad de
Ciencias Pecuarias
ARTÍCULO ORIGINAL
Recibido: 30/03/2023 · Aceptado: 05/04/2023 · Publicado: 30-04-2023
ABSTRACT:
RESUMEN
The aim of the current research was to characterize
the extremophilic bacterial colonies of Tobar Donoso
lagoon, located in Piñán rural community, Imbabura
province. For this, it was necessary to isolate the
bacterial strains in the Plate Count Agar (PCA) growth
medium using the pour-plate technique; the cultures
were incubated at 10, 20 and 37 degrees Celsius (°C)
during 120, 48 and 24 hours respectively; thus, it was
possible to evidence the growth of 19 representative
colonies, which were exposed to macroscopic
characterization. On the other hand, it was necessary
to apply the Gram staining technique to establish
a more specic classication. These colonies were
puried in the same culture medium and inoculated
by streaking, then they were exposed to biochemical
and enzymatic tests. Based on the behavior reected
by each bacterial strain, 5 strains with a genus
Pseudomonas characteristic prole were selected
and evaluated under selective pressure in a Bushnell
Haas minimum medium at dierent concentrations of
hydrocarbons, whose growth was evaluated by means
of optical density at 600 nm. The results revealed
a higher growth percentage at 10 and 20°C, this
allowed determining the existence of psychrophilic
embargo, es importante continuar realizando estudios
de microorganismos extremólos en Ecuador.
Palabras clave: Microbiología, Bioprospección, Psicrólos,
Presión selectiva, Hidrocarburos.
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CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS
DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS DE
LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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microorganisms in the Tobar Donoso lagoon with a high
enzymatic potential. In addition, a greater resistance
to benzene at a concentration of 2% was demonstrated
by the 10°C colonies, while for diesel at 1%, the most
tolerable strain corresponds to an isolation of 37°C. The
psychrophilic microorganisms of the Tobar Donoso
lagoon reected a high enzymatic capacity and a
non-signicant resistance to hydrocarbons; however,
it is important to conduct permanent studies on
extremophilic microorganisms in Ecuador.
Keywords: Microbiology, Bioprospection, Psychrophiles,
Selective pressure, Hydrocarbons.
Estudios revelan la predominancia de ambientes
fríos en la biósfera ocupando alrededor del 85% de
la misma, dentro de los cuales se destacan zonas
polares, océanos y cuerpos hídricos de alta montaña
que constituyen un hábitat óptimo para bacterias,
algas y hongos psicrólos. Estos microorganismos
en la actualidad constituyen un foco central de
investigación debido al desarrollo de mecanismos
biológicos de supervivencia que se traducen como un
elevado potencial biotecnológico especialmente por la
producción enzimática óptima a bajas temperaturas
captando así el interés de la industria farmacéutica,
petrolera, alimentaria, entre otras. La capacidad de
los psicrólos y psicrotolerantes para sobrevivir y
desarrollarse en ambientes fríos que oscilan entre
0-15°C responde a una serie de adaptaciones como el
incremento en la despolarización de sus membranas y
por ende, la disminución del transporte de nutrientes
por medio de ellas, la reducción de los procesos de
reproducción celular por la minimización de los niveles
de traducción y principalmente logran sobrevivir por
la modicación del plegamiento proteico que impide la
desnaturalización de proteínas (1).
La investigación de psicrólos adquiere mayor
importancia debido a los constantes hallazgos tales
como la capacidad de reducción de metales pesados,
especícamente Hierro (III) y Manganeso (IV) por una
bacteria psicróla de géneros Shewanella putrefaciens
aisladas en la Antártida, en dicho trabajo se maniesta
la eciencia de transformación de hierro férrico a
hierro ferroso y la tranferencia de electrones de Mn (IV)
convirtiéndolo en Mn(II) (2). Por otro lado, la industria
alimentaria ja su atención en el microorganismo
Polaromonas vacuolata procedente del océano Antártico
cuya temperatura óptima de desarrollo es 4°C, debido a
la necesidad de enzimas capaces de realizar funciones
catalíticas a temperaturas muy bajas en funciones de
procesamiento de alimentos (3).
Ecuador es un país con una amplia gama de lagunas de
alta montaña que se caracterizan por la existencia de
uctuaciones de temperatura a lo largo del año, por lo
1. INTRODUCCIÓN
que también se presentan cambios en las condiciones
nutricionales; sin embargo, existe la problemática de
que estos ecosistemas son muy poco estudiados a nivel
microbiológico, a pesar de tener un importante aporte
a nivel biotecnológico con un enfoque especial en el
ámbito de la bioprospección; tal es el caso de la Laguna
Tobar Donoso de la comuna de Piñán en la provincia
de Imbabura, por lo que se considera un repositorio
natural de material biológico por explorar y con una
aplicación importante en el campo de la biotecnología.
Por otro lado, la actividad petrolera en el país se
desarrolla a gran escala y, por tanto, los problemas de
contaminación del agua subterránea son cada vez más
frecuentes, para su remediación se emplean surfactanes
químicos que alteran la composición natural del agua;
por ello, el uso de biosurfactantes es más favorable por
las características de biodegradabilidad que presentan
y por la efectividad que demuestran al actuar en
ambientes extremos.
El estudio se realizó en la Laguna Tobar Donoso de
la provincia de Imbabura a 3242 m de altura y forma
parte de la Reserva Ecológica Cotacachi Cayapas,
la población de estudio corresponde a las colonias
bacterianas presentes en las muestras de agua
procedentes del cuerpo lacustre. Esta investigación es
de tipo exploratoria-explicativo debido a que pretende
indagar sobre un tema poco estudiado en el Ecuador, se
considera explicativo ya que analiza las características
principales de las colonias bacterianas de dicho
cuerpo hídrico y se detalla el comportamiento de estos
microorganismos ante la exposición a hidrocarburos;
por otro lado, se desarrolló un diseño experimental
puro aplicado a las muestras de agua de la Laguna Tobar
Donoso en el cual se identica variables independientes
(temperatura y composición del medio de cultivo)
evaluando la respuesta en variables dependientes
(supervivencia a bajos niveles de temperatura y
resistencia a hidrocarburos contenidos en el medio
de cultivo). La metodología de investigación se llevó a
cabo en 6 etapas.
Análisis físico-químico
La recolección de muestras se realizó en base a las
consideraciones e indicaciones estipuladas en la
Norma Técnica Ecuatoriana 2176, para la presente
investigación se tomaron muestras puntuales de
tipo manual recogidas en la supercie, para tal n se
seleccionaros tres puntos de muestreo por duplicado
cuya toma se efectuará en recipientes ámbar evitando
interferencias causadas por la exposición a la luz (4).
Inicialmente se realizó un análisis in situ determinando
los parámetros de temperatura, pH y conductividad
medidos en la Laguna Tobar Donoso en los tres puntos
de muestreo mediante un multiparámetro digital EZ-
9908 que arroja los valores de forma automática y
mediante equipos como el colorímetro, turbidímetro
o procesos de titulación se establecieron en el
2. MATERIALES Y MÉTODOS
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laboratorio los parámetros de color, turbiedad, dureza
y alcalinidad.
Análisis microbiológico
El análisis de la diversidad microbiológica se realizó
empleando el medio de cultivo Agar Plate Count (PCA),
puesto que constituye un medio altamente enriquecido
favorable para el crecimiento de bacterias aerobias
de aguas naturales (5). Posterior a ello, se inoculó
por triplicado a partir de un juego de diluciones
de 10-1 hasta 10-4 garantizando la consecución de
un número contable de colonias; la siembra fue
codicada considerando el punto de muestreo,
temperatura de incubación y tipo de siembra, es así
que las placas inoculadas de PCA fueron incubadas a
tres temperaturas diferentes, 10°C, 20°C y 37°C, estas
últimas se revisaron a las 24 horas, las de 20°C se
realizó el conteo a las 48 horas, mientras que la de 10°C
se incubaron durante 5 días.
Caracterización fenotípica
Se llevó a cabo la caracterización macroscópica de
forma inicial observando aspectos como forma, borde,
color, supercie, elevación y consistencia de las cepas
bacterianas más representativas. La caracterización
microscópica se efectuó mediante la tinción Gram;
sin embargo, los tiempos convencionales del proceso
fueron duplicados ya que los microorganismos
extremólos presentan modicaciones en la
membrana que impide la coloración Gram en un corto
tiempo (6).
Aislamiento y puricación
Para la puricación y aislamiento se realizó una
selección de colonias bacterianas bajo criterios
representativos como el color, borde y consistencia,
el aislamiento de las cepas seleccionadas se desarrolló
en el medio de cultivo PCA sobre el cual se inocularon
las colonias mediante la técnica de estriado y las
cepas se incubaron a 10, 20 y 37°C durante 5, 2 y 1 día
respectivamente.
Caracterización bioquímica
Se efectuó los test de pruebas bioquímicas y
enzimáticas, para lo cual se utilizó las tiras de papel
reactivo compuesta de dicloruro de N,N-dimetil-1,4-
fenilendiamonio 0,1µmol;1-naol 1,0 µmol para la
prueba de oxidasa; para evaluar la presencia de catalasa
se jó una colonia en la placa porta objetos y se añadió
una gota de peróxido de hidrógeno al 30%. El test de
ureasa se llevó a cabo inoculando las cepas en el agar
Urea Christensen, así mismo, fueron sembradas en el
medio de cultivo SIM para revelar la producción de
sulfuro, indol y la presencia de agelos que permiten
su movilización; se evaluó además la fermentación de
glucosa y lactosa al inocular las colonias bacterianas
en medio de cultivo TSI (Triple Sugar Iron) y en Agar
Citrato Simmons para vericar la producción de citrato
(7). Adicionalmente, se evaluó la capacidad enzimática
de las cepas a través de la inoculación en supercie
por picadura en Agar almidón observando la hidrólisis
de almidón, así también, la hidrólisis de lípidos se
comprobó mediante el medio PCA suplementado con
mantequilla 1% V/V y la hidrólisis de caseína se analiza
en medio de cultivo PCA con un suplemento de leche
al 10% V/V.
Resistencia a hidrocarburos
De acuerdo a Acosta et al. (8) uno de los géneros con
mayor resistencia a hidrocarburos es Pseudomonas,
por lo que se procede a analizar los resultados de
las pruebas bioquímicas y se selecciona a aquellas
que cumplen con las características del género de
interés como viables para aplicar presión selectiva
a hidrocarburos, una vez identicadas las cepas se
realizó una activación de las colonias mediante la
inoculación en caldo Luria Bertani ya que representa
un medio de crecimiento óptimo para la mayoría
de microorganismos dejándolas en incubación a
30°C durante 48 horas aproximadamente realizando
agitaciones manuales de 5 minutos cada 6 horas; el
objetivo es alcanzar la densidad óptica de 0.5 a una
longitud de onda de 600nm (9); nalmente, para
determinar la resistencia a hidrocarburos se procedió
a preparar el caldo del medio mínimo Bushnell Haas
suplementado con benceno y diésel por separado
a concentraciones de 0.5, 1 y 2% v/v, se sembró las
colonias bacterianas desarrolladas en el caldo Luria
Bertani con densidad óptima de 0.5 con el asa de
cultivo y se trasladó a los tubos de ensayo con medio
BH suplementado con hidrocarburo incubándose a
30°C durante 48 horas con controles y reporte de la
densidad óptica en 1, 12, 24 y 48 horas.
Las muestras de agua de la laguna Tobar Donoso
presentan una temperatura media de 12.3°C, dato
similar al resultado de Chiguano (10), dicho valor
registrado permite categorizar a este cuerpo lacustre
como una laguna de alta montaña, puesto que Jiménez
Análisis físico-químico
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 1: Resultados del análisis in-situ
Tabla 2: Resultados del análisis ex-situ
Parámetro Resultado
Temperatura 12.3°C
PH 7.12
Conductividad Eléctrica 3.2 µSiems/cm
Sólidos disueltos 19 ppm
Parámetro Resultado
Color 25 UPtCo
Turbiedad 1.18 NTU
Sólidos en suspensión 2 mg/L
Alcalinidad 30mg/L
Dureza 24mg/L
DBO 3.4 mg/L
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
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Gráco 1: Cantidad de colonias por punto de muestreo.
Gráco 2: Cantidad de colonias según la temperatura de
incubación.
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
(2) menciona un rango de 0-24°C como la temperatura
media de este tipo de lagunas asociado con una
elevación entre 3115 a 3779 msnm y la laguna Tobar
Donoso se encuentra a 3242 msnm rearmando la
pertenencia a este grupo de sistemas lacustres.
El valor de pH es de 7.12 muy próximo a la neutralidad,
lo que puede deberse a la inexistencia de factores
antrópicos que puedan contribuir a la alcalinidad
o acidez por la dicultad de acceso que supone la
ubicación de la laguna Tobar Donoso, siendo la única
vía de ingreso una de tercer orden de tierra, así lo
menciona Chiza (11); además la carencia de agentes
contaminantes y perturbadores introducidos por
acción humana justican que dichas aguas presenten
valores mínimos de turbiedad y una coloración casi
transparente.
La conductividad eléctrica es baja en las muestras de
agua debido a la carencia de iones disueltos, valor que
encaja con los resultados de dureza y alcalinidad que
también se encuentra en un nivel bajo, de acuerdo a
Solís-Castro et al. (12) estos tres parámetros guardan
estrecha relación manteniendo un coeciente de
correlación muy próximo a 1.
Una vez que las placas inoculadas se incubaron, se
obtuvo el crecimiento bacteriano a tiempos diferentes
para cada una de las temperaturas de incubación, de
modo que las placas de 37°C mostraron las primeras
colonias a partir de 8 horas, las de 20°C tomaron 48
horas para mostrar el desarrollo y las de 10°C tardaron
5 días. A esta última temperatura se demuestra un
crecimiento del 32.51% del total de cepas crecidas; a
20°C se evidencia el mayor desarrollo bacteriano que
representa al 57.61% y para la mayor temperatura la
proliferación de bacterias fue muy baja y equivale
únicamente al 9.87%.
Los resultados coinciden con la aseveración de
Romero et al. (14), que indica que los microorganismos
se desarrollan en mayor proporción en temperaturas
óptimos de crecimiento, al ser expuestos a los
extremos del rango tolerable o alejarse fuera de
ellos produce una disminución en el metabolismo
del microorganismo reduciendo sus capacidades de
proliferación; las bacterias aisladas en la presente
investigación son categorizadas como psicrólos por
el elevado porcentaje de crecimiento que demuestran
a la temperatura de incubación de 10 y 20°C, ya que
según Oliart-Ros et al. (15) los psicrólos tienen como
temperatura óptima 10-15°C hacia abajo y su rango
tolerable se extiende hasta 25°C; en el caso de la
laguna Tobar Donoso la temperatura reportada es de
12.3°C, por lo tanto, causó un nivel mínimo de estrés
al ser aisladas a 10°C; sin embargo, el crecimiento es
notorio ya que no se aleja en exceso de la temperatura
ambiente. Por otro lado, al ser expuestas a 37°C su
metabolismo impide el desarrollo mostrando muy
poca tolerancia a tal nivel de calor.
Caracterización macroscópica
De las 243 colonias bacterianas contabilizadas se
procede al aislamiento y puricación de 19 de ellas,
seleccionadas por ser las más representativas en
color, forma y demás características macroscópicas,
el resto se descartan porque de acuerdo a los
resultados arrojados en la caracterización fenotípica
son consideradas cepas iguales a las elegidas. De las
colonias aisladas se evidencia una predominancia al
presentar pigmentación diferente: blanca, amarillo,
Después de haberse realizado la inoculación e
incubación respectiva se contabilizó un total de
243 colonias bacterianas, de las cuales el 38.7%
corresponden a la incubación de las muestras del punto
1 que en comparación con los otros puntos presenta
mayor facilidad de contacto con el cuerpo lacustre, así
también se observa mayor presencia y diversidad de
ora nativa; el punto 2 otorgó una cantidad de 82 cepas
que corresponden al 33.7% y nalmente, el punto 3 que
se encuentra rodeado de paja únicamente presenta un
crecimiento de 67 colonias que equivale al 27.6%.
Urbierta (13) describe que el nivel de radiación y
accesibilidad alrededor del cuerpo hídrico son factores
que determinan la variabilidad microbiológica en
número y especie; tal formulación coincide con los
resultados arrojados en esta experimentación ya que
el punto 1 es más accesible y recibe menos incidencia
de la radiación ya que se encuentra cobijado por
vegetación arbórea; en tanto que el punto 3 recibe la
radiación solar de forma directa.
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tomate, crema, rosa y anaranjado, esta característica se
reeja en el 78.94% de las cepas; solamente 4 de ellas
carecen de pigmentación lo que corresponde al 21.06%.
Este rasgo responde a un mecanismo de protección
que presenta la microbiota de sistemas altoandinos,
así lo arma Shivprasad et al. (16), quien argumenta
que el proceso adaptativo de los microorganismos
de alta montaña a la incidencia UV es el desarrollo
de pigmentos endógenos, melaninas y carotenoides.
Además, las cepas sin pigmentación son aisladas del
punto 1 donde existe protección de la radiación por la
vegetación arbórea.
Con relación a la supercie de las cepas bacterianas
caracterizadas, la mayoría de ellas representadas por
el 78.94% son lisas y el 21.06% que corresponde a 4
cepas son rugosas. Esta predominancia se atribuye a
la presencia de lipopolisacáridos en la capa externa de
la membrana, los cuales tienen un elevado contenido
de ácidos grasos insaturados y de cadena corta, que
son los responsables de atrapar los iones divalentes
positivos propios de climas fríos y también son un
mecanismo de defensa que impide el contacto directo
con los cristales de hielo de su medio extracelular (17).
La mayoría de los aislamientos caracterizados tienen
una forma irregular, lo que corresponde al 63.15%;
en tanto que, el 34.84% restante reporta una forma
circular. Además, se reeja una variedad en cuanto
a elevación y borde así; 7 cepas son elevadas lo que
equivale al 36.84%, el mismo porcentaje corresponde
a una elevación convexa y las 5 faltantes son
categorizadas como planas lo que respecta un 26.31%.
La característica de borde irregular se observa con
mayor frecuencia y se presenta en el 42.11%, seguido
del 31.58% que muestra un borde entero, 2 cepas
presentan borde lamentoso, esta cantidad equivale
al 10.53% y nalmente, 1 cepa (5.26%) tiene un borde
lobulado.
Las características ópticas reportadas de las cepas
se aproximan a la mediación ya que el 52.63% son
traslúcidas y el 47.37% restante son colonias opacas.
Por último, la consistencia presentada con mayor
frecuencia es la cremosa que corresponde al 73.68%,
3 (15.79%) cepas son suaves y el faltante 10.53% son
colonias con una consistencia dura.
Caracterización microscópica
Una vez realizada la caracterización microscópica se
observaron células redondas y otras alargadas con
apariencia similar a mini varillas y con una coloración
especíca que permite clasicarlas como Gram
negativas y Gram positivas; es así que, se determina
una presencia mayoritaria de bacterias Gram positivas
pues de los 19 aislamientos, 14 corresponde a esta
categoría lo que representa un porcentaje del 73.68%;
por otro lado, mostrando una coloración rosada se
establece la existencia de 5 cepas bacterianas Gram
negativas, lo que se traduce como el 26.32%. Estos
resultados coinciden con los reportados por González
et al. (18), quien menciona la prevalecencia de Gram
positivas en su estudio del lago cratérico volcánico
Cuicocha ubicado también en la provincia de Imbabura
cuya altura es 3072 msnm y su temperatura oscila entre
8-16°C; características muy similares a las de la laguna
Tobar Donoso.
Por otro lado, 10 (52.63%) de las colonias aisladas en
la observación bajo microscopio mostraron forma
alargada, por lo que se deduce su pertenencia a la
morfología bacilos; mientras que el 47.37% de cepas
restantes se visualizan como pequeñas esferas lo que
corresponde a la morfología cocos.
Pruebas bioquímicas
Posterior a la aplicación de las pruebas bioquímicas
a las 19 cepas aisladas y puricadas se obtiene como
resultado que el 73.68% de las colonias son positivas
para oxidasa denotando una coloración azul violeta en
las tirillas de reacción; en cuanto a la producción de
catalasa el porcentaje que se reporta como positivo tras
la observación de burbujeo inmediato corresponde al
89.47%. En los dos casos se puede apreciar una minoría
que muestran un resultado negativo.
Los resultados tras la inoculación en medio de cultivo
SIM denotan la presencia de agelos en 13 (68.42%)
cepas, los cuales les permiten demostrar movilidad
mediante la aparición de una nube en torno a la línea
de siembra; por otro lado, la producción de indol es
negativa para la mayoría de las cepas y se connota
únicamente en el 21.05% que corresponde a 4 colonias.
Así también, la producción de sulfuro es casi nula y se
evidencia solo en 4 cepas bacterianas.
Cuando los aislamientos fueron inoculados en agar
TSI, se observa que el 42.10% alcanzan un cambio de
coloración del medio en la parte superior del pico de
auta siendo determinadas como positivas para la
fermentación de lactosa; en tanto que, la fermentación
de glucosa con el viraje de color en la parte inferior se
demostró en menos proporción ya que únicamente se
presenta en el 31.57% de las colonias y la producción
de gas glucosa apenas se evidencia en dos cepas que
corresponden al 10.53%.
En la producción de la enzima ureasa se presenta
nulidad absoluta ya que ninguna de las cepas aisladas
demuestra cambio de coloración y nalmente, en
los cultivos en Citrato Simmons se visualiza un viraje
de verde a azul únicamente en tres colonias, lo que
respecta al 15.79% de positivas para esta prueba.
Pruebas enzimáticas
Después de realizar las pruebas enzimáticas a las
19 cepas bacterianas aisladas, se determina que el
63.16% son bacterias capaces de producir la enzima
lipasa y por ende degradar los lípidos; el 78.94%
que corresponde a 15 colonias producen amilasa y
el 68.42% han dado como resultado positivo para la
producción de la enzima caseinasa; de forma general
se comprueba la producción enzimática en la mayoría
de las cepas aisladas. Estos datos corroboran lo
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manifestado por D’Amico et al. (1), quien pone de maniesto la comparación de la gran producción de enzimas
por microorganismos psicrólos en contraste con la proporción en la que se desarrollan estas proteínas en
microbiota mesóla. Así también indica que las enzimas psicrólas poseen mayor eciencia catalítica para
procesos ejecutados a bajas temperaturas, mismos que resultan minimamente efectivos al trabajar con enzimas
aisladas de ambientes mesólos o termólos.
De forma general, las cepas aisladas presentan una elevada capacidad enzimática especialmente en la hidrólisis
del almidón, por lo que se destaca la posibilidad del uso de estas bacterias en la industria alimenticia y ganadera,
ya que su función permite el aprovechamiento de los nutrientes en mayor proporción. Las cepas con capacidad
lipolítica pudieran ser de especial interés para la industria petrolera y automotriz del país (19).
Después de realizar un análisis de los resultados de las pruebas bioquímicas y enzimáticas, se determina 5 cepas
que cumplen con las características para encajar dentro del género Pseudomonas y, por ende, son viables para
la aplicación de presión selectiva con hidrocarburos a n de evaluar su resistencia; las colonias seleccionadas
demuestran la gran capacidad enzimática en la prueba lipolítica, proteolítica y amilolítica, razón por la cual
Calderón y Aguilar (20) arman que estas son capaces de sobrevivir en ambientes extremos con compuestos
orgánicos e inorgánicos contaminantes presentando escasa sensibilidad ante ellos.
La inoculación de bacterias en caldo Luria Bertani permite la activación de las cepas seleccionadas, alcanzando
un punto óptimo que sirve como partida para posteriores ensayos de crecimiento celular en otros medios de
cultivo, así lo indica Corona (21) y Di Martino (22) menciona que la densidad óptica ideal a una longitud de onda
de 600 nm para microorganismos extremólos corresponde a 0.5, con un margen de error de ± 0.05; es así que
en la experimentación se obtienen los valores de absorbancia reejados en la Tabla 4. después de 48 horas de
incubación; sin embargo las dos primeras cepas con nomenclatura Ab y Af están por debajo del margen de error
estipulado en la bibliografía porque son cultivos procedentes de aislamientos de 10°C, y la incubación en caldo
Luria Bertani se la realizó a 30°C; en tanto que, el resto de cepas seleccionadas proceden de incubaciones de 20 y
37°C lo que se traduce en mayor adaptabilidad a la nueva temperatura y por lo tanto, mayor crecimiento reejado
como un nivel superior de absorbancia.
Las mediciones se han realizado a 600 nm ya que Hernández y Acebo (23) maniesta que bajo experimentación
se ha demostrado que a dicha longitud de onda el nivel de absorbancia de las células es insignicante asegurando
así que los valores reportados sean únicamente de la dispersión de la luz por acción de la muestra como tal lo que
permite establecer de forma segura la correlación entre la densidad óptica con la concentración de células.
Tabla 3: Cepas bacterianas seleccionadas para aplicar presión selectiva
Tabla 4: Densidad óptica de las cepas bacterianas en Luria Bertani a 48h
CEPA
OXIDASA
CATALASA
SIM TSI
UREA
CITRATO
Enzimáticas
MOVILIDAD
INDOL
SULFURO
FERM. LACTOSA
FERM. GLUCOSA
GAS GLUCOSA
HIDRÓLISIS LÍ-
PIDOS
HIDRÓLSIS ALMI-
DÓN
HIDRÓLISIS CA-
SEÍNA
Ab + + + - - - - - - - + + +
Af + + + - - - - - - - + + +
Bd + + + + - - + - - - + + +
Bf + + + - + - - + - + + + +
Cb + + + - - - - - - - + + +
Cepas bacterianas seleccionadas
Densidad óptica alcanzada en caldo Luria Bertani
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
CEPA DENSIDAD ÓPTICA (600nm)
Ab
0.436
Af
0.445
Bd
0.473
Bf
0.460
Cb
0.480
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DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS DE
LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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Tabla 5: Absorbancia de las cepas en Bushnell Haas con diferentes concentraciones de diesel.
Absorbancia en diesel a diferentes concentraciones
Fuente: Autores, 2023
CEPA
CONCENTRACIÓN DE DIESEL
0.5 % v/v 1 % v/v 2 % v/v
60 720 1440 2880 60 720 1440 2880 60 720 1440 2880
Ab
0.001 0.015 0.056 0.068 0 0.059 0.106 0.114 0 0.039 0.036 0.043
Af 0 0.01 7 0.029 0.038 0.001 0.054 0.070 0.085 0.001 0.023 0.031 0.035
Bd 0 0.015 0.031 0.063 0 0.049 0.071 0.096 0 0.026 0.031 0.042
Bf 0 0.007 0.024 0.086 0.001 0.083 0.139 0.150 0 0.049 0.06 0.078
Cb 0.001 0.048 0.055 0.124 0.001 0.091 0.147 0.201 0 0.053 0.082 0.121
Gráco 3: Curvas de crecimiento de cepas bacterianas en
caldo suplementado con 0.5% v/v de diesel.
Gráco 4: Curvas de crecimiento de cepas bacterianas en
caldo suplementado con 1% v/v de diesel.
Gráco 5: Curvas de crecimiento de cepas bacterianas en
caldo suplementado con 2% v/v de diesel.
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
La resistencia a diesel se evaluó a partir de un medio
mínimo compuesto únicamente por sales, obligando
de esta manera a las cepas bacterianas al consumo
de dicho hidrocarburo como única fuente de carbono
para su supervivencia; los monitoreos realizados a 1,
12, 24 y 48 horas de incubación arrojan resultados de
absorbancia inferiores a los de las obtenidas como
punto de partida en el caldo Luria Bertani cuyo valor
oscila entre 0.436 y 0.480; en tanto que, en los ensayos
con diésel el mayor valor de absorbancia se reeja a
las 48 horas de incubación de la cepa bacteriana Cb en
el medio con una concentración 1% v/v. Estos datos
son coincidentes con los mencionados por Corona (21)
quien reportó los resultados de resistencia bacteriana
a gasolina cuyos datos de absorbancia también son
inferiores a los del medio sin concentración alguna
del contaminante; indica también que los valores
se atribuyen a la necesidad de una pre-adaptación
de supervivencia en el contaminante mediante una
inoculación en el medio acostumbrado suplementado
con hidrocarburo.
En la tabla 5 se evidencia que la densidad óptica
alcanzada a las 48 horas es mayor para todas las
cepas en el medio con concentración de diésel 1%v/v;
seguido de los resultados en la concentración de 0.5%
v/v, y nalmente, en todas las colonias bacterianas la
absorbancia es menor para la concentración 2% v/v.
Los resultados se justicarían basados en la teoría
del punto óptimo de desarrollo, en la que se estipula
que los microorganismos presentan un crecimiento
idóneo con la cantidad exacta de nutrientes, por el
contrario, cuando este es escaso se presenta una
proliferación más lenta y cuando existe un exceso de
nutriente provoca una sobresaturación del medio para
el microorganismo resultando tóxico, así lo indica
Meritxell (24). Lo manifestado permite determinar que
la concentración 1% v/v es la mejor asimilada por las 5
cepas bacterianas, la de 0.5% v/v es insuciente pero
tolerable para las bacterias; mientras que la de 2% v/v
se estima como tóxico y no asimilable por las colonias
ya que los valores de densidad óptica a 48 horas son
muy bajos.
Tras el análisis de los grácos 3, 4 y 5 se establece que
la cepa Cb es la que muestra los valores más altos de
absorbancia para todas las concentraciones de diésel;
en tanto que, Af es la de los resultados más bajos para
las tres composiciones del medio. Esto se debe a la
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DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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Tabla 6: Absorbancia de las cepas en Bushnell Haas con diferentes concentraciones de benceno
Absorbancia en benceno a diferentes concentraciones
Fuente: Autores, 2023
Gráco 6: Curvas de crecimiento de cepas bacterianas en
caldo suplementado con 0.5% v/v de benceno.
Gráco 8: Curvas de crecimiento de cepas bacterianas en
caldo suplementado con 2% v/v de benceno.
Fuente: Autores, 2023
Fuente: Autores, 2023
inuencia que ejerce la temperatura en la degradación de hidrocarburos siendo un factor determinante de la
composición y población microbiana, es así que entre 30-40°C incrementa al máximo la velocidad metabólica de
las bacterias degradadoras (25). Todas las cepas fueron incubadas a la misma temperatura (30°C) en este ensayo;
sin embargo, la cepa que reporta mayor absorbancia es aislada de la temperatura de 37°C por lo que las nuevas
condiciones de incubación no se muestran desagradables; por el contrario, Af proviene de un aislamiento de 10°C
mostrando poca adaptación a la nueva temperatura y por ende su metabolismo no puede asimilar de forma ideal
el hidrocarburo.
La Tabla 6 reeja los valores de absorbancia que
mostraron las cepas bacterianas en un medio
mínimo suplementado con benceno a distintas
concentraciones, tras el análisis se evidencia que no
existe un comportamiento general para todas las cepas
como se reportó en el análisis con diesel; es así que
CEPA
CONCENTRACIÓN DE BENCENO
0.5 % v/v 1 % v/v 2 % v/v
60 720 1440 2880 60 720 1440 2880 60 720 1440 2880
Ab
0 0.001 0.013 0.125 0.001 0.026 0.051 0.167 0 0.112 0.161 0.173
Af 0 0.019 0.040 0.147 0.001 0.034 0.065 0.194 0 0.064 0.089 0.219
Bd 0.001 0.007 0.061 0.132 0 0.006 0.02 0.038 0.001 0.008 0.014 0.024
Bf 0.001 0.038 0.045 0.151 0 0.012 0.022 0.045 0.001 0.004 0.011 0.031
Cb 0.001 0.004 0.009 0.013 0 0.001 0.006 0.008 0 0.002 0.005 0.007
en este ensayo las colonias bacterianas procedentes
de aislamientos de 10°C alcanzan una absorbancia
creciente en las concentraciones de benceno 0.5%, 1%
hasta 2% v/v a las 48 horas de incubación, siendo Af la
colonia con el valor más alto de densidad óptica en 2%
v/v que corresponde a 0.219. Por otro lado, las bacterias
originarias de aislamientos de 20 y 37°C tienen un
comportamiento inverso, ya que la absorbancia
decrece en el orden 0.5, 1 y 2% y el mayor nivel de
densidad óptica a 0.5% v/v es de la cepa Bf con el valor
de 0.151.
La colonia Cb presenta menor resistencia al benceno
de los 5 aislamientos, esto se comprueba mediante las
absorbancias reportadas. A partir de los resultados se
estima que el benceno es un hidrocarburo con mayor
resistencia al ataque microbiológico debido a factores
físicos como la estructura molecular o por selectividad
ezimática de las bacterias con las que se realizó el
ensayo. (25)
1. La caracterización físico química del agua de la
laguna Tobar Donoso presentó una temperatura media
de 12.3°C, el pH cercano a la neutralidad con un valor
de 7.12; son aguas con bajo color y turbiedad 25 UPtCo,
1.18 NTU respectivamente, la conductividad eléctrica
es baja y presentó un valor de 3.2 µSiems/cm y por ende
la alcalinidad y dureza también lo son, reportando
valores de 2 y 30 mg/L respectivamente y la demanda
bioquímica de oxígeno mostró un resultado de 3.4
mg/L. Tras el análisis y sus resultados se determinó
que es un agua de buena calidad ya que la perturbación
antrópica que presenta es mínima.
2. El análisis microbiológico del agua de la laguna
Tobar Donoso permitió el aislamiento de 243 cepas
procedentes de 3 puntos de muestreo, inoculados
en PCA e incubados a 3 temperaturas diferentes,
4. CONCLUSIONES
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LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
Gordillo, et al.
Reciena Vol.3 Núm. 1 (2023): 16-25
1. D’Amico S, Collins T, Marx JC, Feller G, Gerday
C. Psychrophilic microorganisms: Challenges for
life. EMBO reports [Internet]. 2006 [Consultado
13 May 2022]; 7(4): 385-9. DOI: 10.1038/
sj.embor.7400662.
2. Jiménez Tapia EM. Bacterias poliextremólas
en lagunas de alta montaña y el potencial de su
bioprospección: revisión. [Tesis de pregrado].
5. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
de las cuales el 38.7% proceden del punto 1, 33.7%
corresponden al punto 2 y el 27.6% de cepas
observadas pertenecen al punto 3; el punto 1 que
registra la mayor diversidad microbiana se debe a la
fácil accesibilidad al sitio de muestreo y la incidencia
ocasionada por la variedad de vegetación que rodea al
punto. En relación a las temperaturas de incubación,
se registra una tasa de crecimiento del 57.61% a 20°C,
el 32.51% se obtiene de las cajas incubadas a 10°C y el
9.87% restante proviene de la exposición a 37°C; esta
última temperatura presenta la tasa más baja ya que
se aleja de la temperatura ambiente que oscila los 12°C
dicultando la aclimatación; en tanto que, las otras dos
temperaturas permiten comprobar la existencia de
cepas bacterianas psicrólas.
3. La caracterización macro y microscópica permitió
seleccionar 19 cepas representativas predominando
las cepas con pigmentación típica como mecanismo
de adaptación a la radiación UV, de supercie lisa y
de forma irregular. En cuanto a la caracterización
microscópica existe predominancia de cocos Gram
positivos que corresponden a 9 cepas, 5 cepas son
bacilos Gram negativos y la misma cantidad son
colonias de bacilos Gram positivos. Después del
análisis de los resultados de las pruebas bioquímicas
y enzimáticas permitieron determinar 5 cepas
bacterianas posiblemente pertenecientes al género
Pseudomonas.
4. La evaluación de resistencia a hidrocarburos se
aplicó únicamente a 5 cepas bacterianas (Ab, Af, Bd,
Bf y Cb), las cuales presentan mayor resistencia al
benceno puesto que se reportó valores superiores
de absorbancia tras un periodo de incubación de 48
horas de incubación, comparados con los resultados
obtenidos de los ensayos con diesel. La colonia más
resistente al diésel es Cb, que alcanzó una densidad
óptica de 0.201 para una concentración de 1% v/v, en
tanto que la menos resistente a este compuesto fue la
cepa Af que reportó una absorbancia de 0.085; por el
contrario, en la experimentación con benceno, Af es
la más resistente a 2%v/v, mientras que Cb es la más
sensible ya que alcanzó una absorbancia máxima de
0.013 y corresponde a concentración de 1% v/v; datos
que permiten concluir que las cepas de ensayo tienen
un bajo nivel de resistencia a hidrocarburos como
diésel y benceno.
Riobamba: Escuela Superior Politécnica de
Chimborazo; 2021 [Consultado 17 de mayo de
2022]; Disponible en: http://dspace.espoch.edu.
ec/handle/123456789/15323
3. Ramirez JAS, D NR, T HS. Microorganismos
extremólos. Actinomicetos halólos en México.
Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas
[Internet]. 2006 [citado 13 de mayo de
2022];37(3):56-71. Disponible en: https://www.
redalyc.org/articulo.oa?id=57937307. ISSN: 1870-
0195.
4. INEN. NTE INEN 2176:2013 AGUA. CALIDAD DEL
AGUA. MUESTREO. TÉCNICAS DE MUESTREO
[Internet]. 614.777:620.113 2013 p. 15. Disponible
en: https://gestionambiental.pastaza.gob.ec/
biblioteca/legislacion-ambiental/patrimonio_
natural/nte_inen_2176_1_agua_calidad_agua_
muestreo_tecnicas_muestreo.pdf
5. Bertullo E. Recuento estandar en placa (Aerobic
Plate Count) en productos de la pesca. Veterinaria
(Montevideo) [Internet]. 1981 [citado 22 de julio
de 2022];17(78):141-3. Disponible en: https://
revistasmvu.com.uy/index.php/smvu/article/
view/1025. ISSN: 1688-4809.
6. Forbes BA. Diagnóstico Microbiológico. 12th. ed.
Buenos Aires: Ed. Médica Panamericana; 2009.
1050p.
7. Moreno JR, Albarracín VH. Aislamiento, cultivo e
identicación de microorganismos ambientales
a partir de muestras naturales. Reduca (Biología)
Serie (Microbiología) [Internet]. 2012 [Consultado
22 de julio de 2022]; 5(5): 79-93 Disponible en:
https://ri.conicet.gov.ar/handle/11336/17156.
ISSN: 1989-3620
8. Acosta-Rodríguez I, Moctezuma-Zárate
MG, Tovar-Oviedo J, Cárdenas-González JF.
Aislamiento e Identicación de Bacterias y
Levaduras Resistentes a Petróleo. Información
tecnológica [Internet]. 2011 [citado 24 de febrero
de 2022]; 22(6):103-10. DOI: 10.4067/S0718-
07642011000600011
9. Ugaz-Hoyos J, Vega-Cruz H, Iglesias-Osores
S, Carreño-Farfan C. Biosurfactantes en la
biorremediación de suelos contaminados por
hidrocarburos [Internet]. SciELO Preprints; 2020
[citado 24 de abril de 2022]. DOI: https://doi.
org/10.1590/SciELOPreprints.642
10. Chiguano Ñacato AD. Diseño de una revista
ecoturística de la Reserva Ecológica Cotacachi -
Cayapas ubicada en la provincia de Imbabura -
Ecuador con la nalidad de informar y difundir
un lugar natural a los estudiantes de turismo.
[Tesis de pregrado]. Quito: Tecnológico Superior
Cordillera; 2017 [Consultado 17 de mayo de 2022];
2524
CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS
DE LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
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CARACTERIZACIÓN DE CEPAS BACTERIANAS CON RESISTENCIA A BAJAS TEMPERATURAS DE
LA LAGUNA TOBAR DONOSO EN LA COMUNA PIÑÁN DE LA PROVINCIA DE IMBABURA
Gordillo, et al.
Reciena Vol.3 Núm. 1 (2023): 16-25
Disponible en: http://www.dspace.cordillera.edu.
ec:8080/xmlui/handle/123456789/4516
11. Chiza Roja ML. Estudio de factibilidad para la
implementación del turismo comunitario en la
comunidad de Culquiloma, cantón Cotacachi,
provincia de Imbabura. [Tesis de pregrado].
Quito: Universidad Politécnica Salesiana; 2011
[Consultado 17 de mayo de 2022]; Disponible en:
http://dspace.ups.edu.ec/handle/123456789/5009
12. Solís-Castro Y, Zúñiga-Zúñiga LA, Mora-Alvarado
D. La conductividad como parámetro predictivo
de la dureza del agua en pozos y nacientes de
Costa Rica. TM [Internet]. 2018 [Consultado
17 de mayo de 2022];31(1):35. DOI: 10.18845/
tm.v31i1.3495.
13. Urbieta MS. Diversidad microbiana en ambientes
volcánicos [Internet] [Tesis doctoral]. Argentina:
Universidad Nacional de La Plata; 2013
[Consultado 17 de mayo de 2022]. Disponible en:
http://sedici.unlp.edu.ar/handle/10915/30890
14. Romero E, Cobo J, Melendres KP, Polo LÁT.
EVALUACIÓN DE FACTORES FÍSICOS SOBRE EL
CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS. :8.
15. Oliart-Ros RM, Manresa-Presas Á, Sánchez-Otero
MG, Oliart-Ros RM, Manresa-Presas Á, Sánchez-
Otero MG. Utilización de microorganismos
de ambientes extremos y sus productos en el
desarrollo biotecnológico. CienciaUAT [Internet].
2016 [Consultado 17 de mayo de 2022];11(1):79-
90. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/
scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2007-
78582016000200079&lng=es. ISSN: 2007-7521
16. Shivprasad S, Page WJ. Catechol Formation and
Melanization by Na+ -Dependent Azotobacter
chroococcum: a Protective Mechanism for
Aeroadaptation? Applied and Environmental
Microbiology [Internet]. 1989 [Consultado 18
de mayo de 2022];55(7):1811-7. DOI: https://doi.
org/10.1128/aem.55.7.1811-1817.1989
17. Collins T, Margesin R. Psychrophilic lifestyles:
mechanisms of adaptation and biotechnological
tools. Appl Microbiol Biotechnol [Internet]. 2019
[Consultado 18 de mayo de 2022];103(7):2857-71.
DOI: https://doi.org/10.1007/s00253-019-09659-5
18. González M, Alarcón D, Araque J, Viteri F,
Villacis L, Escobar S, et al. Microbiología del
agua perteneciente al lago cratérico volcánico
Cuicocha. Imbabura. Ecuador: Estudio inicial.
Rev. Fac. Farm; 2021 [Consultado 18 de mayo de
2022];63(1). DOI: 10.53766/REFA/2021.63.01.03
19. Dorado MG. ENZIMAS MICROBIANAS. 2016
[citado 22 de julio de 2022]; Disponible en:
https://www.academia.edu/36468317/ENZIMAS_
MICROBIANAS
20. Calderón G, Aguilar L. Resistencia
antimicrobiana: Microorganismos más
resistentes y antibióticos con menor actividad.
Rev Med Cos Cen [Internet]. 2016 [Consultado
19 mayo de 2022]; 73(621):757-63. Disponible
en: https://www.binasss.sa.cr/revistas/rmcc/621/
art03.pdf. ISSN: 2215-5201
21. Corona Galicia AM. Evaluación de cepas
bacterianas promotoras del crecimiento
vegetal para degradar hidrocarburos ligeros
y compuestos aromáticos (BTX). [Tesis de
pregrado]. Puebla: Benemérita Universidad de
Puebla; 2018 [Consultado 19 de mayo de 2022];57.
Disponible en: https://repositorioinstitucional.
buap.mx/handle/20.500.12371/7730
22. Di Martino C. Estudio de bacterias del género
Pseudomonas en la degradación de hidrocarburos
y síntesis de biosurfactantes: análisis del efecto de
los polihidroxialcanoatos. [Internet]. Universidad
de Buenos Aires; 2015 [Consultado 19 de mayo
de 2022]. Disponible en: http://repositoriouba.
sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?e=d-10000-
00---o-0aextesis--00-2----0-10-0---0---0direct-10-
-SU--4-------0-1l--10-es-Zz-1---20-about-HIDROX
ILACION--00-3-1-00-00--4----0-0-01-00-0utfZz-8-
00&a=d&cl=CL2.5&d=tesis_n5752_DiMartino_oai
23. Hernández-García AT, Acebo-González D. Los
métodos Turbidimétricos y sus aplicaciones en
las ciencias de la vida. Revista CENIC Ciencias
Biológicas [Internet]. 2013 [Consultado 19 de
mayo de 2022];44(1). Disponible en: https://www.
redalyc.org/articulo.oa?id=181226886003. ISSN:
0253-5688.
24. Meritxell. Modelización de crecimientos
microbianos en medios heterogéneos y de
movilidad reducida. En: Modelling in Science
Education and Learning [Internet]. Universitat
Politècnica de Valencia; 2016 [citado 20 de
mayo de 2022]. p. 81-120. DOI: doi: 10.4995/
msel.2016.57890
25. Bracho M, Díaz L, Soto LM. Degradación de
Hidrocarburos Aromáticos por Bacterias
Aisladas de Suelos Contaminados con Petróleo
en el Estado Zulia, Venezuela. Boletín del Centro
de Investigaciones Biológicas [Internet]. 2004
[citado 16 de diciembre de 2021];38(3). Disponible
en: https://produccioncienticaluz.org/index.
php/boletin/article/view/31. ISSN: 2477-9458.
